После охлаждения до комнатной температуры 5-10 см куб фильтрата титруют 0,05 моль/дм куб раствором азотнокислого серебра в присутствии 0,5 см куб раствора хромовокислого калия до оранжевого окрашивания.

Обработка результатов

Массовую долю хлористого натрия X, %, вычисляют по формуле

Х = 0,00292 * К * v * 100 * 100 / v1 * m

где 0,00292 — количество хлористого натрия, эквивалентное 1 см куб 0,05 моль/дм куб раствора азотнокислого серебра, г;

К — поправка к титру 0,05 моль/дм куб раствора азотнокислого серебра;

v — количество 0,05 моль/дм куб раствора азотнокислого серебра, израсходованное на титрование испытуемого раствора, см куб;

v1 — количество водной вытяжки, взятое для титрования, см куб;

т — навеска, г.

Расхождение между результатами параллельных определений не должно превышать 0,1 %. За окончательный результат принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений.

2. Определение хлористого натрия по фольгарду с применением роданида калия. Метод Фольгарда основан на освобождении испытуемого образца от белковых веществ и оттитровывании избытка добавленного раствора азотнокислого серебра раствором роданистого калия в присутствии железоаммонийных квасцов как индикатора.

Аппаратура, материалы и реактивы:

весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 500 г, с допустимой погрешностью взвешивания ± 0,01 г по ГОСТ 24104;

баня водяная;

бюретка 1-2-25-0,1, 2-2-25-0,1 или 3-2-25-0,1 по ГОСТ 29251;

пипетка 1-2-2, 2-2-2, 4-2-2 или 5-2-2; 2-2-5, 6-2-5 или 7-2-5, 2-2-10, 6-2-10 или 7-2-10; 2-2-20, 6-2-25 -или 7-2-25 по ГОСТ 29169;
цилиндр 1-10 или 3-10, 1-100 или 3-100 по ГОСТ 1770, вымеренный на отливной объем;

стакан В-1-250 или Н-1-250 ТХС по ГОСТ 25336;

колбы конические П-2-250-34 или Кн-2-250-34 ТХС по ГОСТ 25336;

колбы 1-200-2 или 2-200-2; 1-1000-2 или 2- 1000-2 по ГОСТ 1770;

бумага фильтровальная по ГОСТ 12026;

серебро азотнокислое по ГОСТ 1277, раствор с (AgNO3,) =0,1 моль/дм куб;

калий роданистый по ГОСТ 4139, раствор с (KSCN) =0,1 моль/дм3 (титр раствора устанавливают по 0,1 моль/дм куб растовору AgNO3, с использованием в качестве индикатора раствора железоаммонийных квасцов);

калий железистосинеродистый 3-водный по ГОСТ 4207;

цинк уксуснокислый по ГОСТ 5823;

квасцы железоаммонийные по ТУ 6-09-5359, насыщенный раствор, подкисленный концентрированной азотной кислотой (индикатор);

вода дистиллированная по ГОСТ 6709;

кислота азотная по ГОСТ 4461, раствор с (HNO3) = 4 моль/дм куб;

кислота уксусная по ГОСТ 61;

нитробензол.

Приготовление растворов:

- Реактив Карреза I: 106 г железистосинеродистого калия K4Fe(CN)63Н2О, х. ч., растворяют в дистиллированной воде и доводят объем раствора до 1 дм куб (хранят в склянке из темного стекла не более 10 суток).

- Реактив Карреза II: 238 г уксуснокислого цинка Zn (CH3COO)2Н2О и 30 см куб ледяной уксусной кислоты растворяют в дистиллированной воде и доводят объем раствора до 1 дм куб (хранят не более 10 суток).

Проведение испытания. 10 г измельченной средней пробы, взвешенной с точностью до ± 0,01 г, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 200 см куб и добавляют небольшими порциями около 100 см куб горячей дистиллированной воды. Колбу выдерживают на кипящей водяной бане 15 мин. После охлаждения колбы с содержимым до комнатной температуры в нее последовательно добавляют для осаждения белков 10 см куб реактива Карреза I и 10 см куб реактива Карреза II, встряхивая колбу после добавления каждого реактива.

Затем в колбу доливают дистиллированную воду до метки, содержимое тщательно перемешивают и фильтруют через складчатый бумажный фильтр. 20 см куб фильтрата пипеткой переносят в коническую колбу вместимостью 200—250 см куб, добавляют 5 см куб 4 моль/дм куб раствора азотной кислоты, 2 см куб раствора железоаммонийных квасцов, 20 см куб 0,1 моль/дм куб раствора азотнокислого серебра и 3 см куб нитробензола (для коагуляции осадка). Содержимое колбы титруют 0,1 моль/дм куб раствором роданистого калия при энергичном встряхивании до появления неисчезающей красноватой окраски раствора.

Обработка результатов испытаний

Массовую долю хлористого натрия X, %, вычисляют по формуле

X = 0,00584 * (20 K1 – v K2) * 200 * 100/ m * 20 =

= 5,84 (20K1 – vK2) / m

где 0,00584 — количество хлористого натрия, эквивалентное 1 см куб 0,1 моль/дм куб раствора AgNO3, г;

К1 — поправка к титру 0,1 моль/дм куб раствора AgNO3, с точностью до 0,0001 моль/дм куб;

v — количество роданистого калия, израсходованное на титрование, см куб;

К2 — поправка к титру 0,1 моль/дм куб раствора KSCN;

т — навеска, г;

200 — разбавление навески, см куб;

20 — количество титруемого раствора, см куб. Вычисление производят с точностью до 0,01%.

Расхождение между результатами параллельных определений не должно превышать 0,1 %.

За окончательный результат принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений

Метод определения нитрита

Сущность метода. Экстрагирование пробы горячей водой, осаждение белков и фильтрование. Получение красной окраски в присутствии нитрита путем добавления к фильтрату аминобензола сульфамида и -1-нафтилэтилендиамина дигидрохлорида и фотометрическое измерение при длине волны 538 нм.

Все реактивы должны быть аналитическими. Вода должна быть дистиллированной или иметь эквивалентную чистоту.

Раствор для осаждения белков:

Реактив I. Растворяют в воде 106 г железосинеродистого калия [KFe(CN)·3HO] и разбавляют до 1000 см.

Реактив II. Растворяют в воде 220 г уксуснокислого цинка [Zn(CHCOO)·2HO] и 30 см ледяной уксусной кислоты и разбавляют до 1000 см.

Бура, насыщенный раствор. Растворяют 50 г тетраборнокислого натрия (NaBO·10HO) в 1000 см тепловатой воды и охлаждают до комнатной температуры.

Нитрит натрия, эталонные растворы: Растворяют в воде 1,000 г нитрита натрия (NaNO) и разбавляют до 100 см в мерной колбе с одной меткой. С помощью пипетки наливают 5 см раствора в мерную колбу вместимостью 1000 см и разбавляют до метки.

Готовят серию эталонных растворов, наливая с помощью пипетки 5, 10 и 20 см полученного раствора в мерные колбы вместимостью 100 см и доливая водой до метки. Полученные эталонные растворы содержат соответственно 2,5; 5,0 и 10,0 мкг нитрита натрия на 1 см.

Эталонные растворы и разбавленный (0,05 г/дм) раствор нитрита натрия, из которого их получают, следует готовить в день проведения анализа.

Растворы для получения окраски:

Раствор I. Растворяют, подогревая на водяной бане, 2 г аминобензола сульфамида (NHCHSONH) в 800 см воды. Охлаждают, при необходимости фильтруют и добавляют, помешивая, 100 см концентрированной соляной кислоты ( 1,19 г/см), затем доливают водой до 1000 см.

Раствор II. Растворяют в воде 0,25 г -1-нафтилэтилендиамина дигидрохлорида (CHNHCHCHNH·2HCl), доливают водой до 250 см. Полученный раствор хранят в холодильнике, в хорошо укупоренной бутыли из коричневого стекла не более недели.

Раствор III. Разбавляют 445 см концентрированной соляной кислоты ( 1,19 г/см) водой до 1000 см.

Оборудование:

Обычное лабораторное оборудование, а также:

Механическая мясорубка лабораторного типа с перфорированной пластиной, диаметр отверстий которой не превышает 4 мм.

Аналитические весы.

Мерные колбы с одной меткой вместимостью 100, 200 и 1000 см в соответствии с #M12291 1200027328ГОСТ 1770#S.

Пипетки с одной меткой вместимостью 10 см, при необходимости с другой вместимостью в зависимости от аликвотной части фильтрата (п.8.4.1), соответствующие требованиям #M12291 1200024085ГОСТ 29169#S.

Кипящая водяная баня.

Фотоэлектрический колориметр или спектрофотометр с камерами, имеющими оптическую длину 1 см.

Гофрированная фильтровальная бумага диаметром около 15 см, не содержащая нитрита.

Коническая колба вместимостью 300 см.

Проба: используют показательную пробу массой не менее 200 г (#M12291 1200016971ГОСТ 9792#S). Пробу для анализа готовят сразу или, если это невозможно, хранят пробу при температуре от 0 до 5 °С в течение не более 4 сут.

Проведение анализа

Приготовление пробы для анализа. Пропускают пробу через мясорубку (п.6.1) не менее двух раз и перемешивают. Хранят в герметичном, целиком заполненном сосуде в охлажденном состоянии. Анализ проводят не позднее чем через 24 ч после приготовления пробы.

Образец для анализа: Взвешивают 10 г пробы с точностью до 0,001 г.

Освобождение от белков. Образец для анализа помещают в коническую колбу и добавляют последовательно 5 см насыщенного раствора буры и 100 см воды при температуре не ниже 70 °С.

Нагревают колбу на кипящей бане в течение 15 мин, периодически встряхивая.

Дают колбе с содержимым остыть до комнатной температуры и добавляют последовательно 2 см реактива I и 2 см реактива II, тщательно перемешивая после каждого добавления.

Переливают содержимое в мерную колбу вместимостью 200 см, доливают водой до метки и перемешивают. Содержимое колбы выдерживают в течение 30 мин при комнатной температуре.

Осторожно сливают верхний слой жидкости и фильтруют его через гофрированную фильтровальную бумагу, получая прозрачный раствор.

Колориметрическое измерение. Пипеткой переносят часть фильтрата (, см), но не более 25 см, в мерную колбу вместимостью 100 см и доливают водой до 60 см. Добавляют 10 см раствора I, затем 6 см раствора III, перемешивают и оставляют на 5 мин в темноте при комнатной температуре. Добавляют 2 см раствора II, перемешивают и оставляют на 3-10 мин в темноте при комнатной температуре. Затем разбавляют водой до метки.

Измеряют показатель спектрального поглощения раствора на фотоэлектрическом колориметре или спектрофотометре при длине волны около 538 нм.

Количество определений. Проводят два независимых определения на двух отдельных образцах, взятых из одной пробы для анализа.

Калибровочная кривая. С помощью пипетки наливают в четыре мерные колбы вместимостью 100 см 10 см воды и 10 см каждого из трех эталонных растворов нитрита натрия, содержащих 2,5; 5,0 и 10,0 мкг нитрита на 1 см.

Вычерчивают калибровочную кривую, нанося на график полученные показатели спектрального поглощения против показателей концентрации эталонных растворов в микрограммах на 1 см.

Обработка результатов.

Подсчет результатов. Содержание нитрита в пробе, выраженное в миллиграммах нитрита натрия на килограмм, вычисляют по формуле

где - масса образца, г;

- объем части фильтрата, взятой для фотометрического определения, см;

- концентрация нитрита натрия в мкг/см, определенная по калибровочной кривой и соответствующая показателю спектрального поглощения раствора, полученного из образца

За результат анализа принимают среднеарифметическое значение результатов двух определений, при условии соблюдения требования к воспроизводимости. Результат выражают с точностью до 1 мг на килограмм продукта.

Воспроизводимость результатов. Разница между результатами двух определений, проводимых одновременно или в близкой последовательности одним и тем же лицом, может составлять не более 10% от среднего результата.

Протокол анализа. В протоколе анализа указывают использованный метод и полученные результаты, все действия, не предусмотренные данным стандартом или рассматриваемые как дополнительные, а также любые обстоятельства, которые могли бы повлиять на результат.

В протокол должны быть также включены все сведения, необходимые для полной идентификации пробы.

Методы определения влаги

Отбор проб производят по ГОСТ 9792. Пробы продуктов освобождают от оболочек или шкуры и измельчают. Пробы колбасных изделий, вареных, варено-копченых, копчено-запеченных, запеченных и жареных продуктов, фаршевых консервов, а также соленого бекона два раза измельчают на бытовой или электрической мясорубке и тщательно перемешивают.

Пробы сырокопченых колбас дважды измельчают на электрической мясорубке или нарезают острым ножом на круговые ломтики толщиной не более 1 мм, после чего их режут на полоски и рубят ножом так, чтобы размер частиц пробы не превышал 1 мм, и тщательно перемешивают.

Пробы паштетов, студней и зельцев измельчают на бытовой или электрической мясорубке один раз и тщательно перемешивают.

Подготовленную для испытания пробу помещают в стеклянную банку с притертой пробкой, вместимостью 200-400 см, заполнив ее полностью, и сохраняют при температуре от 3 до 5 °С до окончания испытаний. Испытания проводят в течение 24 ч.

Аппаратура, реактивы и материалы. Для определения влаги должны применяться следующие аппаратура, реактивы и материалы:

мясорубка бытовая по ГОСТ 4025 или электромясорубка бытовая по ГОСТ 20469 с диаметром отверстий решетки 4 мм;

шкаф сушильный, электрический с терморегулятором;

сушильный аппарат САЛ;

весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 200 г с допускаемой погрешностью взвешивания ±0,001 г по ГОСТ 24104;

баня водяная;

стаканчики для взвешивания СВ-14/8, СВ-19/9 по ГОСТ 25336 или бюксы металлические диаметром 50 мм, высотой 25-35 мм;

эксикатор 2-140, 2-190, 2-250 по ГОСТ 25336;

палочки стеклянные;

сита с диаметром отверстий 0,3 мм и 1,5 мм;

спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 18300;

песок речной или кварцевый, обработанный следующим образом: песок, просеивающийся через сито диаметром отверстий 1,5 мм и остающийся на сите с диаметром отверстий 0,3 мм, промывают водопроводной водой до тех пор, пока вода перестанет мутнеть. Затем песок заливают двойным объемом разбавленной соляной кислоты (1:1) и выдерживают в течение суток, периодически перемешивая. После обработки кислотой песок промывают водой до нейтральной реакции промывных вод на лакмус, высушивают при (155±5) °С и хранят в закрытой склянке.

Устройство Я10-ФВУ.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Кислота соляная по ГОСТ 3118.

Определение влаги высушиванием в сушильном шкафу при температуре (103±2) °с.

В бюксу помещают песок в количестве, примерно в 2-3 раза превышающем навеску продукта, стеклянную палочку длиной несколько больше диаметра бюксы (чтобы она не мешала закрывать бюксу крышкой) и высушивают в сушильном шкафу в открытой бюксе при температуре (103±2) °С в течение 30 мин. Затем бюксу закрывают крышкой, охлаждают в эксикаторе до комнатной температуры и взвешивают. Во взвешенную бюксу с песком вносят навеску продукта от 4 до 5 г и повторно взвешивают. К содержимому приливают 5 см этилового спирта и перемешивают стеклянной палочкой.

Помещают бюксу на водяную баню (80-90 °С) и, помешивая палочкой, нагревают до исчезновения запаха этилового спирта. Затем пробу высушивают в течение 2 ч в сушильном шкафу при температуре (103±2) °С, охлаждают в эксикаторе и взвешивают.

Высушивание продолжают до постоянной массы. Каждое повторное взвешивание проводят после высушивания в течение 1 ч при температуре (103±2) °С. Результаты двух последовательных взвешиваний не должны отличаться более чем на 0,1% массы навески.

Определение влаги высушиванием в сушильном шкафу при температуре (150±2) °с

В бюксу помещают песок в количестве, примерно в 2-3 раза превышающем навеску продукта, стеклянную палочку и высушивают в сушильном шкафу при температуре (150±2) °С в течение 30 мин. Затем бюксу закрывают крышкой, охлаждают в эксикаторе до комнатной температуры и взвешивают. Затем в бюксу с песком вносят навеску продукта от 2 до 3 г, взвешивают повторно, тщательно перемешивают с песком стеклянной палочкой и высушивают в сушильном шкафу в открытой бюксе при температуре (150±2) °С в течение 1 ч. Затем бюксу закрывают крышкой, охлаждают в эксикаторе до комнатной температуры и взвешивают.

Определение влаги высушиванием в устройстве Я10-ФВУ

Во взвешенную со стеклянной палочкой бюксу вносят навеску продукта массой от 1,8 до 2,2 г, добавляют от 1,8 до 2,2 см дистиллированной воды, тщательно перемешивают стеклянной палочкой, равномерно распределяя содержимое по дну бюксы. Открытую бюксу с пробой помещают в одну из секций (13) блока высушивания (11) устройства Я10-ФВУ (см. чертеж) и высушивают от 16 до 18 мин при температуре (163±2) °С и скорости движения воздуха (3,6±0,1) м/с. Бюксу извлекают из блока высушивания, закрывают крышкой, помещают в одну из секций блока охлаждения (19), охлаждают в потоке воздуха комнатной температуры от 5 до 7 мин при скорости движения воздуха (5±1) м/с и взвешивают.

1 - таймер; 2 - сигнальная лампа; 3 - тумблер вентилятора; 4 - регулятор вентилятора; 5 - предохранитель;

6 - регулятор температуры; 7 - тумблер регулятора температуры; 8 - корпус командного устройства;

9 - тумблер электрической сети; 10 - сигнальная лампа; 11 - секция блока высушивания; 12 - нагреватель;

13 - держатель бюксы в блоке высушивания; 14 - бюкса; 15 - крышка секции блока высушивания;

16 - терморезистор; 17 - стакан; 18 - крышка блока охлаждения; 19 - отверстия блоков высушивания

и охлаждения; 20 - воздушный зазор; 21 - вентиляторы; 22 - корпус;

23 - изолирующая перегородка; 24 - диффузор

Определение влаги высушиванием в сушильном аппарате САЛ

Перед началом работы сушильный аппарат САЛ прогревают в течение 10-15 мин при напряжении 150-200 В. После прогрева ламп устанавливают напряжение 100-105 В, что обеспечивает температуру в зоне сушки 135-140 °С.

В бюксу помещают песок в количecтвe, примерно в 2-3 раза превышающем навеску продукта, стеклянную палочку длиной несколько больше диаметра бюксы (чтобы она не мешала закрывать бюксу крышкой) и высушивают в сушильном аппарате САЛ при температуре 135-140 °С в течение 10 мин. Зачем бюксу закрывают крышкой, охлаждают в эксикаторе до комнатной температуры и взвешивают. Во взвешенную бюксу с песком вносят навеску продукта от 2 до 2,5 г, повторно взвешивают и перемешивают стеклянной палочкой. Затем бюксу помещают в аппарат САЛ и высушивают при температуре 135-140 °С в течение 20 мин, охлаждают в эксикаторе и взвешивают.

Обработка результатов

Массовую долю влаги () в процентах вычисляют по формуле

где - масса бюксы с песком и палочкой, г;

- масса бюксы с песком, палочкой и навеской, г;

- масса бюксы с песком, палочкой и навеской после высушивания, г.

Примечание. При вычислении массовой доли влаги, определяемой методом высушивания в устройстве Я10-ФВУ, масса песка не учитывается.

За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение двух параллельных определений.

Расхождение между результатами параллельных определений не должно превышать 0,5%.

Окончательный результат вычисляют с погрешностью до 0,1%.

2.6. Методы бактериалогического анализа

Аппаратура, материалы, реактивы. Для проведения бактериологического анализа применяют следующие аппаратуру, материалы и реактивы:

автоклав вертикальный по ТУ 27-31-2939;

аппарат Коха;

весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104;

гомогенизатор бактериологический, смеситель или аппарат для измельчения тканей;

микроскоп марок МБИ и МБР или других аналогичных марок;

мясорубку бытовую по ГОСТ 4025;

потенциометр;

термостат электрический с автоматическим терморегулятором;

термостат или водяную баню с терморегулятором;

холодильник электрический бытовой по ГОСТ 16317;

шкаф сушильный лабораторный;

бумагу парафинированную по ГОСТ 9569;

бумагу фильтровальную лабораторную по ГОСТ 12026;

вату медицинскую гигроскопическую по ГОСТ 5556;

воронки В-36-80 ХС, ВФ-1-75 ХС по ГОСТ 25336;

лупы с увеличением 3 и 5;

марлю медицинскую по ГОСТ 9412;

марлю бытовую по ГОСТ 11109;

ножницы медицинские по ГОСТ 21239;

петлю бактериологическую;

палочки стеклянные;

пинцеты медицинские по ГОСТ 21241;

пипетки Мора вместимостью 25 и 50 см;

термометры стеклянные технические по ГОСТ 28498;

пипетки пастеровские;

пипетки 7-1-1; 7-1-2; 7-1-5; 7-1-10; 8-2-0,1 по ГОСТ 29169;

пробирки П2-10-90 ХС; П3-5 ХС по ГОСТ 25336;

скальпель медицинский по ГОСТ 21240;

стаканы В-1-250 ТС; Н-2-100 ТХС по ГОСТ 25336;

колбы К-2-250-34 ТХС; П-2-250-34 ТХС по ГОСТ 25336;

спиртовка СЛ-1 по ГОСТ 25336;

стекла предметные для микропрепаратов по ГОСТ 9284;

стекла покровные для микропрепаратов по ГОСТ 6672;

ступки фарфоровые с пестиком по ГОСТ 9147;

флаконы Сокслета;

цилиндры 2-100; 4-100; 4-25 по ГОСТ 1770;

колбы мерные 2-100-2; 2-250-2; 2-1000-2 по ГОСТ 1770;

часы песочные на 1, 2, 5 мин;

чашка ЧБН-1-40 по ГОСТ 25336;

штативы для пробирок;

агар микробиологический по ГОСТ 17206;

агар Эндо, сухой;

белок яичный;

бриллиантовый зеленый;

воду бромную;

бромкрезолпурпур;

бульон мясо-пептонный по ГОСТ 20730;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709;

воду мясную по ГОСТ 20729;

генциан-виолет;

гидролизат рыбный сухой;

глюкозу кристаллическую по ГОСТ 975, х.ч.;

глицерин по ГОСТ 6259, х.ч.;

дрожжи хлебопекарные прессованные по ГОСТ 171;

диализат дрожжевой;

железо сернокислое по ГОСТ 4148;

железо хлористое;

желчь крупного рогатого скота;

йод по ГОСТ 4159;

калий йодистый по ГОСТ 4232;

калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198, ч.д.а.;

калий фосфорнокислый двузамещенный по ГОСТ 2493, ч.д.а.;

кальций углекислый по ГОСТ 4530;

кислоту розоловую;

кислоту соляную по ГОСТ 14261, ос.ч., плотностью 1,19 г/см;

кристалл-виолет;

лактозу, х.ч.;

маннит, х.ч.;

магний сернокислый по ГОСТ 4523;

магний хлористый по ГОСТ 4209, х.ч.;

масло вазелиновое медицинское по ГОСТ 3164;

масло иммерсионное для микроскопии по ГОСТ 13739;

метиленовый голубой;

мел химический осажденный по ГОСТ 8253;

мочевину по ГОСТ 6691, х.ч.;

набор адсорбированных поливалентных сывороток и монорецепторных агглютинирующих О и Н сальмонеллезных сывороток;

натрий двууглекислый по ГОСТ 4201;

натрия гидроокись по ГОСТ 4328;

натрий кислый селенистокислый (без теллура);

натрий сернистокислый безводный по ГОСТ 195;

натрий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 245, ч.д.а.;

натрий фосфорнокислый двузамещенный безводный по ГОСТ 11773, ч.д.а.;

натрий хлористый по ГОСТ 4233, х.ч.;

панкреатин;

парадиметиламидобензальдегид;

пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по ГОСТ 13805;

песок кварцевый для тонкой керамики по ГОСТ 7031;

плазму цитратную сухую (кроличью);

сахарозу по ГОСТ 5833, х.ч.;

соль закиси железа и аммония двойную сернокислую (соль Мора) по ГОСТ 4208;

спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300;

спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962*;

среду Вильсон-Блера (сухую);

среду КОДА, сухую питательную;

среду Левина сухую;

среду Плоскирева сухую;

среду кито-пентоно-дрожжевую, сухую (среду КПД);

среды сухие с углеводами и индикатором "ВР" (среды Гисса);

натрий серноватистокислый по ГОСТ 27068, х.ч.;

фуксин (основной и кислый) для микробиологических целей;

хинозол;

хлороформ по ГОСТ 20015;

Д-циклосерин.

Подготовка к анализу. Окраску препаратов по Граму проводят по ГОСТ 21237.

Приготовление физиологического раствора: 8,5 г хлористого натрия растворяют в 1 дм водопроводной воды. Раствор стерилизуют при давлении 10 Па в течение 20 мин.

Приготовление пептонной воды: В 1 дм дистиллированной воды добавляют 10 г пептона и 5 г хлористого натрия. Жидкость подогревают до растворения пептона, фильтруют, устанавливают рН 7,2-7,4 и стерилизуют при давлении 10 Па в течение 20 мин.

Приготовление мясо-пептонного агара (МПА): В 1 дм мясо-пептонного бульона добавляют 20 г агара-агара и кипятят при слабом нагревании, постоянно помешивая до полного растворения агара. Устанавливают рН среды 7,0-7,2.

Охлаждают до температуры 50-55 °С и осветляют яичным белком (из расчета белок одного яйца на 1 дм мясо-пептонного агара). Помещают агар в автоклав (не завинчивая крышку) или в аппарат Кохха на 1 ч, чтобы белок свернулся и, оседая, увлек за собой взвешенные частицы. Горячий раствор фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Разливают во флаконы и пробирки и стерилизуют в автоклаве в течение 20 мин при давлении 10 Па.

Питательная среда может быть приготовлена из сухого питательного агара.

Приготовление голодного агара: 2 г агара-агара растворяют в 100 см водопроводной воды. Раствор стерилизуют при давлении 10 Па в течение 20 мин.

Приготовление бульона Хоттингера: В 1 дм кипящей водопроводной воды опускают на 20 мин 1 кг мяса, освобожденного от костей, жира и сухожилий, нарезанного мелкими кусочками. Затем мясо вынимают, измельчают на мясорубке, снова кладут в тот же отвар. Добавляют 40 г измельченной поджелудочной железы, очищенной от жира и дважды пропущенной через мясорубку (вместо поджелудочной железы можно брать 5 г панкреатина), доливают 20 см хлороформа. Бутыль плотно закрывают пробкой и энергично встряхивают (пробку надо придерживать). Смесь оставляют для переваривания в термостате при 45 °С до 20 сут. Мясо в виде мелкозернистой массы оседает на дно бутыли. Жидкость над мясом должна быть прозрачной. Эту жидкость сливают и стерилизуют при 10 Па в течение 20 мин. Готовый раствор дает положительную реакцию на триптофан с бромной водой.

Приготовление бромной воды: 3-3,5 см чистого брома растворяют в 100 см дистиллированной (стерильной) воды.

Приготовление мясо-пептонного бульона (МПБ) на основе бульона Хоттингера: Основной раствор Хоттингера разводят в 5-10 раз (до соломенного цвета). На 1 дм разведенного бульона берут 10 г пептона и 5 г хлористого натрия. Затем устанавливают рН 7,3-7,4, кипятят 20 мин и фильтруют.

Режим стерилизации 20 мин при давлении 10 Па.

Приготовление среды Эндо: В 100 см расплавленного мясо-пептонного агара добавляют 1 г лактозы, растворенной в 5 см водопроводной воды, прокипяченной в течение 5 мин. МПА охлаждают до температуры 60-70 °С и к нему добавляют смесь растворов основного фуксина и сернистокислого натрия. Для приготовления смеси 0,5 г сернистокислого натрия растворяют в 5 см стерильной воды, кипятят в течение 5 мин, добавляют 1 см спиртового раствора 100 г/дм основного фуксина. После перемешивания среду разливают в чашки Петри. Среда Эндо в чашках должна иметь бледно-розовый цвет.

Среду Эндо готовят в день ее использования. Среда Эндо может быть приготовлена из сухой готовой среды.

Приготовление среды КОДА (сухая готовая) проводят согласно инструкции, утвержденной в установленном порядке.

Приготовление среды "ХБ (хинозол-бромкрезол-пурпypной): Для приготовления бромкрезол-пурпура 0,8 г порошка заливают 50 см этилового ректификованного спирта. Через день раствор готов к употреблению.

Раствором можно пользоваться в течение месяца со дня приготовления.

Для приготовления хинозола 0,1 г порошка растворяют в 100 см стерильной дистиллированной воды. При хранении свойства его не изменяются. Срок хранения не ограничен.

Краски хранить в темном месте при комнатной температуре.

Приготовление дрожжевого автолизата: В 600 см стерильной воды растворяют 1 г однозамещенного фосфорнокислого калия и 0,1 г сернокислого магния, затем добавляют 100 г прессованных хлебных дрожжей и взбалтывают до получения суспензии. В колбу с суспензией наливают 8-10 см хлороформа, закрывают ватной пробкой и накрывают колпачком из парафинированной бумаги (для предотвращения испарения). Колбу помещают в термостат при температуре 45-47 °С на 10 сут. Затем ставят на водяную баню и кипятят в течение 20 мин, фильтруют и стерилизуют при давлении 5·10 Па в течение 15 мин.

Дрожжевой автолизат хранят в холодильнике при температуре 4-6 °С в течение двух недель.

В 1 дм водопроводной воды растворяют 10 г пептона, 5 г хлористого натрия и 5 г маннита, кипятят 15-20 мин, устанавливают рН 7,4-7,6, фильтруют через бумажный фильтр, вновь кипятят 10 мин и охлаждают до температуры 60 °С. Стерильно добавляют 30 см дрожжевого автолизата, 15 см желчи крупного рогатого скота, 10 см раствора хинозола (1:1000) и 10 см 1,6%-ного спиртового раствора бромкрезол-пурпурного. Среду разливают в стерильные пробирки по 7-8 см.

Цвет готовой среды - фиолетовый.

Приготовление среды Хейфеца: Для приготовления розоловой кислоты 0,5 г порошка заливают 10 см этилового ректификованного спирта; через 24 ч раствор готов к употреблению. Раствором можно пользоваться в течение месяца со дня приготовления.

Для приготовления метиленового голубого 0,1 г порошка заливают 100 см дистиллированной воды. Через сутки раствор готов к употреблению. При хранении свойства его не изменяются, срок хранения не ограничен.

Краски хранить в темном месте при комнатной температуре.

В 1 дм водопроводной воды растворяют 10 г пептона, 5 г хлористого натрия и 5 г маннита, устанавливают рН 7,4-7,6, нагревают до кипения, фильтруют, добавляют 1 см спиртового раствора 50 г/дм розоловой кислоты и 2,5 см раствора 1 г/дм метиленового голубого, стерилизуют однократно, нагревая 20 мин в аппарате Коха, или кипятят в колбе, закрытой ватной пробкой, в течение 5 мин.

Среду разливают по 7-9 см в стерильные пробирки размером 19х180 мм. Цвет среды в пробирках должен быть красно-фиолетовый.

Среду Хейфеца двойной концентрации готовят аналогичным образом, уменьшив количество водопроводной воды до объема 500 см.

Среду разливают в пробирки по 10 см.

Приготовление среды Кесслер (модифицированной): В 1 дм дистиллированной воды помещают 10 г пептона, 50 см желчи, кипятят 30 мин, фильтруют через вату, добавляют 2,5 г лактозы и доводят объем дистиллированной водой до первоначального (1 дм), добавляют 2 см водного раствора 10 г/дм цианвиолета. Среду разливают в пробирки с поплавками по 10 см и стерилизуют при давлении 5·10 Па в течение 15 мин. Среда имеет фиолетовый цвет.

Допускается замена поплавков клочками стерильной ваты.

Приготовление среды Мюллера:

Приготовление раствора серноватистокислого натрия. В мерный цилиндр с 50 г тиосульфата натрия добавляют дистиллированную воду до метки 100 см. Полученный раствор стерилизуют однократно в аппарате Коха 20 мин.

Приготовление раствора Люголя. В 100 см стерильной дистиллированной воды растворяют 25 г кристаллического йода и 20 г йодистого калия.

В стерильную колбу помещают 4,5 г х.ч. мела и стерилизуют сухим жаром при температуре 150 °С в течение 15 мин, наливают 90 см мясо-пептонного бульона (по п.3.8), стерилизуют в течение 30 мин при давлении 10 Па. В колбу с мясо-пептонным бульоном и мелом стерильно добавляют 2 см раствора Люголя и 10 см раствора серноватистокислого натрия, взбалтывают.

Приготовление среды Кауфмана: В 100 см стерильной среды Мюллера, приготовленной по п.3.15, стерильно добавляют 1 см водного раствора 1 г/дм бриллиантовой зелени и 5 см стерильной желчи крупного рогатого скота. Смесь хорошо взбалтывают (не стерилизуют).

Приготовление среды Гиса:

Для приготовления индикатора Андреде в 100 см дистиллированной воды растворяют 18,4 см 1 моль/дм раствора гидроокиси натрия и 0,3 г кислого фуксина. Раствор стерилизуют 5 мин при давлении 5·10 Па и хранят в темноте.

В 100 см дистиллированной воды растворяют 1 г пептона и 0,5 г хлористого натрия при нагревании. Затем фильтруют до тех пор, пока раствор не станет совершенно прозрачным.

В фильтрате устанавливают рН 7,0, прибавляют 0,5 г углевода, а затем 1 см индикатора Андреде. Полученную смесь разливают в пробирки с поплавками по 5 см и стерилизуют 20 мин при давлении 5·10 Па.

Среда должна быть бесцветной или соломенно-желтого цвета, без розового оттенка.

Допускается использовать готовые среды Гисса - сухой препарат с индикатором "ВР" и маннитом, лактозой, сахарозой, глюкозой.

Среду Плоскирева приготавливают из сухой готовой среды.

Среду Левина приготавливают из сухой готовой среды.

Среду висмут-сульфит-агар приготавливают из сухой готовой среды.

Приготовление хлористомагниевой среды "М" (модифицированной): Среда состоит из трех растворов А, В и С.

Приготовление дрожжевого экстракта: В 2 дм дистиллированной воды растворяют 1 кг прессованных хлебопекарных дрожжей. Полученную суспензию стерилизуют 30 мин текучим паром, затем отстаивают в холодильнике при температуре 4-6 °С в течение 5-6 сут.

Жидкость над осадком декантируют, приливают 2,5 см 0,01%-ного раствора кристалл-виолета, разливают во флаконы или пробирки и вновь стерилизуют при температуре 100 °С в течение 30 мин.

Экстракт хранят в холодильнике при температуре 4-6 °С в течение двух недель со дня приготовления.

Для приготовления раствора А в 90 см дистиллированной воды растворяют 0,42 г пептона, 0,7 г хлористого натрия, 0,15 г однозамещенного фосфорнокислого натрия, 2 см дрожжевого диализата. (При отсутствии дрожжевого диализата допускается заменять его дрожжевым экстрактом).

Для приготовления раствора В в 9 см дистиллированной воды растворяют 3,6 г кристаллического хлористого магния.

Раствор С состоит из 0,09 см водного раствора 50 г/дм бриллиантовой зелени.

Для приготовления хлористомагниевой среды "М" (модифицированной) растворы А, В и С смешивают и стерилизуют 30 мин при давлении 5·10 Па.

Приготовление среды Крумвиде-Олькеницкого в модификации Ковальчука: В 1 дм дистиллированной воды растворяют 1 г гипосульфита, 0,6 г соли Мора, 10 г мочевины, 15 г лактозы х.ч., 3,5 г сахарозы и 2 г глюкозы. Устанавливают рН среды до 7,4-7,6. Добавляют 46 г сухой среды с сахарозой и индикатором ВР. Все размешивают, кипятят в водяной бане в течение 40 мин. Разливают в пробирки по 5-6 см. Среду, разлитую в пробирки, стерилизуют 20 мин при давлении 5·10 Па. После стерилизации среду скашивают так, чтобы в пробирке остался столбик высотой не менее 3 см.

Приготовление агара с бриллиантовым, зеленым и феноловым красным (БФА)

Для приготовления растворов красок: 0,5 г бриллиантового зеленого растворяют в 100 см дистиллированной воды;

0,4 фенолового красного, 16 см 0,1 моль/дм гидроокиси натрия - в 184 см дистиллированной воды.

Оба приготовленных раствора в плотно закрытых флаконах выдерживают в термостате при температуре 37 °С в течение суток. Небольшим нерастворившимся осадком можно пренебречь.

Для приготовления смеси красок в 200 см раствор фенолового красного добавляют 5 см бриллиантового зеленого. Смесь хранят в холодильнике. Срок хранения смеси не ограничен.

В 1 дм дистиллированной воды вносят 50 г сухого питательного агара, 10 г лактозы, 40 см 0,1 моль/дм соляной кислоты.

Смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 30 мин, затем в кипящей водяной бане не менее 1 ч, после чего на открытом огне (электроплитке) в течение 3-5 мин, фильтруют через вату (небольшой мутностью можно пренебречь).

Смесь разливают во флаконы, стерилизуют при давлении 5·10 Па в течение 30 мин и хранят в холодильнике до месяца со дня приготовления.

В 100 см среды с агаровой основой, предварительно расплавленной и охлажденной до 45 °С, вносят 4,1 см смеси красок. Среду разливают по чашкам Петри. Среда имеет цвет бутылочного стекла - зеленовато-желтый.

Приготовление молочно-солевого агара

Для приготовления солевого мясо-пептонного агара 65 г/дм в 1 дм расплавленного мясо-пептонното агара (пп.3.4; 3.5) добавляют 65 г х.ч. хлористого натрия. Устанавливают рН-7,4. Стерилизуют в автоклаве в течение 20 мин при давлении 10 Па.

В 100 см расплавленного и охлажденного солевого агара до 45 °С (п.3.24.1) добавляют 10 см стерильного обезжиренного молока, разливают по чашкам Петри. Среду хранят в холодильнике при температуре 4-9 °С в течение недели со дня приготовления.

Приготовление желточно-солевого агара (среды Чистович): Для приготовления желточного раствора в 200 см стерильного физиологического раствора добавляют стерильно один яичный желток и раствор взбалтывают. Раствор хранят в холодильнике при температуре 4-9 °С в течение одной недели со дня приготовления.

В 150 см расплавленного и охлажденного до 45 °С солевого агара 65 г/дм (п.3.24.1) стерильно добавляют 50 см желточного раствора, взбалтывают и разливают по чашкам Петри. Среду хранят в холодильнике при температуре 4-9 °С в течение недели со дня приготовления.

Приготовление нитратной плазмы: К 8 см свежей крови кролика добавляют стерильно 2 см лимоннокислого натрия 50 г/дм и отстаивают в холодильнике при температуре 4-9 °С в течение суток.

Страницы: 1, 2, 3, 4